獸藥評審中心發布獸藥殘留試驗技術規范（試行）

獸藥殘留試驗技術規范（試行）

    獸藥在動物性食品中的殘留（簡稱獸藥殘留），是指獸藥的原形化含物或其代謝產物在動物細胞、組織、器官或可食性產品（如奶、蛋）中的蓄積和貯存。獸藥殘留對消費者（人類）可能產生毒害作用，從而影響人類的健康和消費安全。為了加強新獸藥的審批管理，保障動物用藥對人的食品消費的安全，根據《新獸藥及獸藥新制劑管理辦法》的規定，特制定本規范。

一、獸藥殘留試驗的基本要求

    凡申請在食品動物（如牛、羊、豬、兔、禽、水產養殖動物等）使用的獸用藥物及其制劑均需進行殘留試驗，獸藥殘留試驗必須在靶動物進行。

承擔獸藥殘留試驗的實驗室必須達到通過計量認證的基本要求，具有良好的儀器設備、動物試驗設施、相關工作經驗的技術人員數名。并能實施《良好實驗室管理規范》（GLP），試驗記錄規范，原始數據保留完整。能夠隨時供檢查調檔。

二、獸藥殘留試驗的主要內容

    1．獸藥在食品動物的原形化合物、主要代謝物或標志殘留物的確定；

    2．獸藥最高殘留限量（MRL）的確定；

    3．獸藥殘留檢測方法的建立；

    4，獸藥在食品動物可食性組織中的原型化合物、主要代謝物或標志殘留物殘留濃度及其消除規律；

    5．獸藥在注射部位的殘留濃度及其消除規律；

    6．獸藥在食品動物使用后休藥期的確定。

    三、獸藥在食品動物的主要代謝物或標志殘留物的確定

    一般獸藥不作此項試驗，經毒性試驗證明有嚴重毒性或疑有“三致”作用的獸藥則需按如下要求做此項試驗。

    1．主要代謝物的確定

       測定零休藥期（零休藥期定義為大動物在最后一次給藥后8～12小時，奶在最后給藥后12小時，禽在最后給藥后4小時）的峰濃度。代謝物的含量超過10％總殘留或其濃度超過0．lppm，則認定該代謝物為主要代謝物。一類新獸藥對主要代謝物需做結構確認，做光譜分析，并定出結構式。一類新獸藥應在實驗動物評價主要代謝物的潛在毒性。

    2．靶組織的確定

       靶組織是指藥物（原型藥物和代謝物）殘留濃度最高、時間最長的可食組織。

    3．標志殘留物的確定

       標志殘留物是指靶組織中殘留時間最長的藥物（原型藥物或代謝物）。四、獸藥最高殘留限量（MRL）的確定

    1．最大無毒性作用劑量（No observed effect level，NOEL）的確定

    最大無毒性作用劑量是根據最敏感實驗動物（一般為大鼠、兔、狗）的毒理學試驗，對動物不產生任何毒性的最大劑量。實際是一種從實驗動物外推到人的安全性數據。具體來講，就是根據獸藥的三性（急性、亞慢性／慢性）和三致（致突變、致畸胎、致癌）試驗結果得來。

    2．每日允許攝入量（Acceptable Daily Intake，ADI）的確定

每日允許攝入量是指可以被一個人安全地消費而不產生任何作用的量。

ADI=NOEL/安全因子

其中安全因子：如果NOEL是根據急性試驗得到的，安全因子為1000；如果NOEL是根據慢性試驗得到的，安全因子則為100。

    3．最高殘留限量（Maximum Residue Limit，MRL）的確定

    最高殘留限量是指對食品動物用藥后產生的法律允許或認為可接受的存在于食物表面或內部的該獸藥殘留的最高量／濃度。

    根據ADI，計算出各種組織中的最高殘留限量。

    MRL＝（ADI×60kg／天）/（組織消費量／天）

    其中，組織消費量如下（按WTO推薦）：

          肌肉         300g

          脂肪          50g

          肝臟         100g

          腎臟          50g

          蛋           100g

          奶           1.5L

五、獸藥殘留檢測方法的建立

    殘留的檢測國際上一般采用同位素標記藥物的方法，目前由于我國采用同位素標記方法尚有困難，故可根據藥物的性質選用氣相色譜（GC）法、高效液相色譜（HPLC）法和氣相色譜—質譜朕用（GC－MS）或液—質聯用（LC－MS）法。

對選用方法的精密度（變異系數）、回收率和最低檢測限的要求如下；

    1．精密度

    精密度以變異系數（CV％）表示，所采用的檢測方法應符合殘留檢測方法精密度的要求，根據待測物濃度不同，其精密度要求如表1。

    表1  不同待測物濃度的精密度要求

    注：變異系數（CV％）應盡可能小。

2．回收率

    用添加法測定回收率，至少選定3個添加濃度，一般最低檢測限（或2倍）為必選的濃度。每一濃度5個樣，進行不少于4次重復試驗。

    不同添加濃度的回收率原則要求如下：

    添加濃度m（mg/kg）    回收率（％）

    p≥0.1                80～110

    0.1＞p≥0.01          70～110

    001＞p≥0.001         60～120

    p≤0.001              50～120

    3．靈敏度

    靈敏度以最低檢測限（mg/kg或μg/kg）表示。檢測方法的靈敏度必須低于或等于相應的最高殘留限量，其相關數值見表2。

    表2  方法靈敏度與規定最高殘留限量相應值的數值關系

六、獸藥在可食性組織的殘留濃度及其消除規律的試驗方法

    （一）材料

    1．動物  食品動物：20～25頭，一般要求成年健康動物，公母各半。

    2．可食性組織  大動物：肌肉、肝、腎、脂肪（肌肉一般用腿肌）。

                   禽：肌肉、肝、腎、皮膚（含脂肪）、腹脂（肌肉一般用胸肌）。

                   蛋：按每個時間點收集，注明產蛋日期和產蛋雞號。

                   奶：取4個乳區的混合奶作檢測樣本。

    3．藥物  與臨床應用相同的制劑（相同批號的產品）

       劑量  采用推薦劑量高限

       給藥途徑  與臨床實際應用相同

     給藥時間  一般藥物連續給藥7天（或按實際療程需要時間），雞蛋殘留檢測需連續給藥12天

    （二）方法

    1．采樣程序  停藥后，分5個時間點，每點不少于4～5頭動物。在零休藥期必須有一個點，最后一點應≤最低檢測限。緩釋制劑的采樣程序應根據制劑的實際情況制訂。

    2．樣品數量

    蛋：每個時間點不少于10枚

    奶：每個時間點不少于100ml（羊奶200～500ml）

    采集的樣本不得進行任何洗滌或處理。所取樣本應立即做好標記、包裝，保存于-20℃冰箱，對于不穩定的藥物應置于相應要求的溫度下存放至測定。樣本保存時間一般不應超過1個月。

    3．測定  每種組織均進行平行雙樣本（duplicate）測定。

七、獸藥在注射部位的濃度及其消除規律的試驗方法

    1．采樣程序  肌內注射：皮膚去毛后，以注射點為中心，劃10×10cm方形，采10×10×6cm（深）的肌肉為樣本；皮下注射：皮膚去毛后，劃15×15cm方形，采15×15×2.5cm（深）的肌肉為樣本。

    2．其他參考“六”。

八、獸藥在食品動物使用后休藥期的確定

    休藥期是指食品動物從停止給藥到活動物或其產品（奶、蛋）許可屠宰（上市）的間隔時期。

    休藥期的確定必須依據獸藥在可食性組織的殘留濃度及其消除規律的試驗數據來定。經數理統計，必須確保有95％的可信限使99％的殘留都低于MRL。也就是說，臨床用藥后，有95％的把握可以保證99％的用藥動物，其組織中殘留都低于MRL。

九、對獸藥殘留試驗申報材料的具體要求

    獸藥殘留試驗申報材料請按如下格式書寫。

    （一）前言

    對藥物的理化性質、作用、應用作簡要說明。

    （二）材料與方法

    1．食品動物應說明品種、性別、體重、年齡。

    2．藥物應說明來源、批號、劑量、給藥途徑和給藥時間。試劑應說明批號、等級。

    3．樣品應說明采樣時間、保存條件、測定時間。

    4．測定方法要求說明：回收率、變異系數、最低檢測限、標準曲線的相關系數。內標法或外標法。

    （三）結果

    1．列表說明每頭動物、每種組織的測定數據，算出休藥期，按統計學要求進行檢驗。

    2．數據的可信限要求為95%±10%。

    3．提供必要的方法和實測結果的色譜圖。

    （四）討論與結論

    1．對試驗結果、方法等進行分析、討論。    
     2．引述文獻或國外資料進行分析對比。

    3．結論。

來源：獸藥評審中心

P020240407324384091643.doc