獸藥評(píng)審中心發(fā)布獸藥殘留試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范（試行）

獸藥殘留試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范（試行）

    獸藥在動(dòng)物性食品中的殘留（簡稱獸藥殘留），是指獸藥的原形化含物或其代謝產(chǎn)物在動(dòng)物細(xì)胞、組織、器官或可食性產(chǎn)品（如奶、蛋）中的蓄積和貯存。獸藥殘留對(duì)消費(fèi)者（人類）可能產(chǎn)生毒害作用，從而影響人類的健康和消費(fèi)安全。為了加強(qiáng)新獸藥的審批管理，保障動(dòng)物用藥對(duì)人的食品消費(fèi)的安全，根據(jù)《新獸藥及獸藥新制劑管理辦法》的規(guī)定，特制定本規(guī)范。

一、獸藥殘留試驗(yàn)的基本要求

    凡申請(qǐng)?jiān)谑称穭?dòng)物（如牛、羊、豬、兔、禽、水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物等）使用的獸用藥物及其制劑均需進(jìn)行殘留試驗(yàn)，獸藥殘留試驗(yàn)必須在靶動(dòng)物進(jìn)行。

承擔(dān)獸藥殘留試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室必須達(dá)到通過計(jì)量認(rèn)證的基本要求，具有良好的儀器設(shè)備、動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)施、相關(guān)工作經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員數(shù)名。并能實(shí)施《良好實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范》（GLP），試驗(yàn)記錄規(guī)范，原始數(shù)據(jù)保留完整。能夠隨時(shí)供檢查調(diào)檔。

二、獸藥殘留試驗(yàn)的主要內(nèi)容

    1．獸藥在食品動(dòng)物的原形化合物、主要代謝物或標(biāo)志殘留物的確定；

    2．獸藥最高殘留限量（MRL）的確定；

    3．獸藥殘留檢測方法的建立；

    4，獸藥在食品動(dòng)物可食性組織中的原型化合物、主要代謝物或標(biāo)志殘留物殘留濃度及其消除規(guī)律；

    5．獸藥在注射部位的殘留濃度及其消除規(guī)律；

    6．獸藥在食品動(dòng)物使用后休藥期的確定。

    三、獸藥在食品動(dòng)物的主要代謝物或標(biāo)志殘留物的確定

    一般獸藥不作此項(xiàng)試驗(yàn)，經(jīng)毒性試驗(yàn)證明有嚴(yán)重毒性或疑有“三致”作用的獸藥則需按如下要求做此項(xiàng)試驗(yàn)。

    1．主要代謝物的確定

       測定零休藥期（零休藥期定義為大動(dòng)物在最后一次給藥后8～12小時(shí)，奶在最后給藥后12小時(shí)，禽在最后給藥后4小時(shí)）的峰濃度。代謝物的含量超過10％總殘留或其濃度超過0．lppm，則認(rèn)定該代謝物為主要代謝物。一類新獸藥對(duì)主要代謝物需做結(jié)構(gòu)確認(rèn)，做光譜分析，并定出結(jié)構(gòu)式。一類新獸藥應(yīng)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物評(píng)價(jià)主要代謝物的潛在毒性。

    2．靶組織的確定

       靶組織是指藥物（原型藥物和代謝物）殘留濃度最高、時(shí)間最長的可食組織。

    3．標(biāo)志殘留物的確定

       標(biāo)志殘留物是指靶組織中殘留時(shí)間最長的藥物（原型藥物或代謝物）。四、獸藥最高殘留限量（MRL）的確定

    1．最大無毒性作用劑量（No observed effect level，NOEL）的確定

    最大無毒性作用劑量是根據(jù)最敏感實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（一般為大鼠、兔、狗）的毒理學(xué)試驗(yàn)，對(duì)動(dòng)物不產(chǎn)生任何毒性的最大劑量。實(shí)際是一種從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外推到人的安全性數(shù)據(jù)。具體來講，就是根據(jù)獸藥的三性（急性、亞慢性／慢性）和三致（致突變、致畸胎、致癌）試驗(yàn)結(jié)果得來。

    2．每日允許攝入量（Acceptable Daily Intake，ADI）的確定

每日允許攝入量是指可以被一個(gè)人安全地消費(fèi)而不產(chǎn)生任何作用的量。

ADI=NOEL/安全因子

其中安全因子：如果NOEL是根據(jù)急性試驗(yàn)得到的，安全因子為1000；如果NOEL是根據(jù)慢性試驗(yàn)得到的，安全因子則為100。

    3．最高殘留限量（Maximum Residue Limit，MRL）的確定

    最高殘留限量是指對(duì)食品動(dòng)物用藥后產(chǎn)生的法律允許或認(rèn)為可接受的存在于食物表面或內(nèi)部的該獸藥殘留的最高量／濃度。

    根據(jù)ADI，計(jì)算出各種組織中的最高殘留限量。

    MRL＝（ADI×60kg／天）/（組織消費(fèi)量／天）

    其中，組織消費(fèi)量如下（按WTO推薦）：

          肌肉         300g

          脂肪          50g

          肝臟         100g

          腎臟          50g

          蛋           100g

          奶           1.5L

五、獸藥殘留檢測方法的建立

    殘留的檢測國際上一般采用同位素標(biāo)記藥物的方法，目前由于我國采用同位素標(biāo)記方法尚有困難，故可根據(jù)藥物的性質(zhì)選用氣相色譜（GC）法、高效液相色譜（HPLC）法和氣相色譜—質(zhì)譜朕用（GC－MS）或液—質(zhì)聯(lián)用（LC－MS）法。

對(duì)選用方法的精密度（變異系數(shù)）、回收率和最低檢測限的要求如下；

    1．精密度

    精密度以變異系數(shù)（CV％）表示，所采用的檢測方法應(yīng)符合殘留檢測方法精密度的要求，根據(jù)待測物濃度不同，其精密度要求如表1。

    表1  不同待測物濃度的精密度要求

    注：變異系數(shù)（CV％）應(yīng)盡可能小。

2．回收率

    用添加法測定回收率，至少選定3個(gè)添加濃度，一般最低檢測限（或2倍）為必選的濃度。每一濃度5個(gè)樣，進(jìn)行不少于4次重復(fù)試驗(yàn)。

    不同添加濃度的回收率原則要求如下：

    添加濃度m（mg/kg）    回收率（％）

    p≥0.1                80～110

    0.1＞p≥0.01          70～110

    001＞p≥0.001         60～120

    p≤0.001              50～120

    3．靈敏度

    靈敏度以最低檢測限（mg/kg或μg/kg）表示。檢測方法的靈敏度必須低于或等于相應(yīng)的最高殘留限量，其相關(guān)數(shù)值見表2。

    表2  方法靈敏度與規(guī)定最高殘留限量相應(yīng)值的數(shù)值關(guān)系

六、獸藥在可食性組織的殘留濃度及其消除規(guī)律的試驗(yàn)方法

    （一）材料

    1．動(dòng)物  食品動(dòng)物：20～25頭，一般要求成年健康動(dòng)物，公母各半。

    2．可食性組織  大動(dòng)物：肌肉、肝、腎、脂肪（肌肉一般用腿肌）。

                   禽：肌肉、肝、腎、皮膚（含脂肪）、腹脂（肌肉一般用胸肌）。

                   蛋：按每個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集，注明產(chǎn)蛋日期和產(chǎn)蛋雞號(hào)。

                   奶：取4個(gè)乳區(qū)的混合奶作檢測樣本。

    3．藥物  與臨床應(yīng)用相同的制劑（相同批號(hào)的產(chǎn)品）

       劑量  采用推薦劑量高限

       給藥途徑  與臨床實(shí)際應(yīng)用相同

     給藥時(shí)間  一般藥物連續(xù)給藥7天（或按實(shí)際療程需要時(shí)間），雞蛋殘留檢測需連續(xù)給藥12天

    （二）方法

    1．采樣程序  停藥后，分5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每點(diǎn)不少于4～5頭動(dòng)物。在零休藥期必須有一個(gè)點(diǎn)，最后一點(diǎn)應(yīng)≤最低檢測限。緩釋制劑的采樣程序應(yīng)根據(jù)制劑的實(shí)際情況制訂。

    2．樣品數(shù)量

    蛋：每個(gè)時(shí)間點(diǎn)不少于10枚

    奶：每個(gè)時(shí)間點(diǎn)不少于100ml（羊奶200～500ml）

    采集的樣本不得進(jìn)行任何洗滌或處理。所取樣本應(yīng)立即做好標(biāo)記、包裝，保存于-20℃冰箱，對(duì)于不穩(wěn)定的藥物應(yīng)置于相應(yīng)要求的溫度下存放至測定。樣本保存時(shí)間一般不應(yīng)超過1個(gè)月。

    3．測定  每種組織均進(jìn)行平行雙樣本（duplicate）測定。

七、獸藥在注射部位的濃度及其消除規(guī)律的試驗(yàn)方法

    1．采樣程序  肌內(nèi)注射：皮膚去毛后，以注射點(diǎn)為中心，劃10×10cm方形，采10×10×6cm（深）的肌肉為樣本；皮下注射：皮膚去毛后，劃15×15cm方形，采15×15×2.5cm（深）的肌肉為樣本。

    2．其他參考“六”。

八、獸藥在食品動(dòng)物使用后休藥期的確定

    休藥期是指食品動(dòng)物從停止給藥到活動(dòng)物或其產(chǎn)品（奶、蛋）許可屠宰（上市）的間隔時(shí)期。

    休藥期的確定必須依據(jù)獸藥在可食性組織的殘留濃度及其消除規(guī)律的試驗(yàn)數(shù)據(jù)來定。經(jīng)數(shù)理統(tǒng)計(jì)，必須確保有95％的可信限使99％的殘留都低于MRL。也就是說，臨床用藥后，有95％的把握可以保證99％的用藥動(dòng)物，其組織中殘留都低于MRL。

九、對(duì)獸藥殘留試驗(yàn)申報(bào)材料的具體要求

    獸藥殘留試驗(yàn)申報(bào)材料請(qǐng)按如下格式書寫。

    （一）前言

    對(duì)藥物的理化性質(zhì)、作用、應(yīng)用作簡要說明。

    （二）材料與方法

    1．食品動(dòng)物應(yīng)說明品種、性別、體重、年齡。

    2．藥物應(yīng)說明來源、批號(hào)、劑量、給藥途徑和給藥時(shí)間。試劑應(yīng)說明批號(hào)、等級(jí)。

    3．樣品應(yīng)說明采樣時(shí)間、保存條件、測定時(shí)間。

    4．測定方法要求說明：回收率、變異系數(shù)、最低檢測限、標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)。內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法。

    （三）結(jié)果

    1．列表說明每頭動(dòng)物、每種組織的測定數(shù)據(jù)，算出休藥期，按統(tǒng)計(jì)學(xué)要求進(jìn)行檢驗(yàn)。

    2．?dāng)?shù)據(jù)的可信限要求為95%±10%。

    3．提供必要的方法和實(shí)測結(jié)果的色譜圖。

    （四）討論與結(jié)論

    1．對(duì)試驗(yàn)結(jié)果、方法等進(jìn)行分析、討論。    
     2．引述文獻(xiàn)或國外資料進(jìn)行分析對(duì)比。

    3．結(jié)論。

來源：獸藥評(píng)審中心

P020240407324384091643.doc